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人膽管癌細胞（HuH28）培養說明書

更新時間：2018-08-24　點擊量：2529

人膽管癌細胞(HuH28)說明書

貨號：HICL-039

細胞特性

1） 來源：膽管癌

2）形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞接受后的處理：

1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。

2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

3）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的*培養基。

4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的*培養基。

5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

本公司的細胞培養操作規程，供參考

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X10⁶個細胞凍存。