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馬外周血白細胞分離液說明書

更新時間：2016-08-11　點擊量：1537

馬外周血白細胞分離液說明書

（細胞培養(yǎng)及分子生物學）

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

貨號：WBC1094

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

			名稱		產(chǎn)品編號		規(guī)格

	A	馬外周血白細胞分離液					200ml

	B	樣本稀釋液（贈品）			2010C1119		200ml

	C	清洗液（贈品）			2010X1118		200ml

	D	紅細胞裂解液（贈品）			NH4CL2009		100ml

	E	說明書					1 份

【實驗前準備】
A．適用儀器
	zui大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
B．耗材

	產(chǎn)品名稱			產(chǎn)品貨號		產(chǎn)地

	15ml 離心管散裝			339650		美國 NUNC

	15ml 離心管架裝			339651		美國 NUNC

	50ml 離心管散裝			339652		美國 NUNC

	50ml 離心管架裝			339653		美國 NUNC

	無菌膠頭滴管或塑料滴管

【檢驗方法】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。

首先取抗凝血，根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：

情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實驗方法如下：

取一支 15ml 離心管，先加入 5ml 分離液

用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：如改

變血液樣本及分離液用量，需相應調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸

索，以達到zui理想分離效果。）

離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。250g，離心 10min。重復洗滌 2-3 次，即得所需白細胞。

如有紅細胞殘留請使用紅細胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）裂解紅細胞，具體操

作方法詳見“紅細胞裂解液使用說明”。

情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實驗方法如下：

取一支適當?shù)碾x心管，先加入與樣本等量的分離液。

將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到zui理想分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。

剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 與步驟 4。

【注意事項】

全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得zui理想的實驗結(jié)果，在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

本實驗不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

分離液用量大于稀釋后血液樣本時，分離效果更佳。

當血液樣本粘度過高需稀釋時，*稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚浴Ｈ缪簶颖窘?jīng)過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。

如實驗后細胞得率或活性過低，請技術(shù)以尋求幫助。

【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實驗白細胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。

	紅細胞		白細胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關實驗技術(shù)方案】

所獲得白細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得白細胞的核酸提取技術(shù)。

所獲得白細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索“細胞分離、

純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項目欄下下載使用。

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短	適當增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長
離心后目的細胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

離心后白環(huán)層彌散	細胞密度過大	調(diào)整細胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細胞密度過小

本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當?shù)厍闆r對離心條件進行適當調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。

本分離液依照標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細胞沉降不*的情況，可以適當加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達到zui理想分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。

貨號	品牌	產(chǎn)品名稱
淋巴細胞分離液
LTS1077	TBD	人外周血淋巴細胞分離液內(nèi)毒素<0.5EU
LTS1077-1	TBD	人外周血淋巴細胞分離液（FICOLL配置）
LTS10771		人外周血淋巴細胞分離液內(nèi)毒素<0.25EU
LTS1077Z		人臟器組織淋巴細胞分離液KIT
LTS1077P		人肺癌組織淋巴細胞分離液KIT
LTS1077006		樣本密度分離液（人外周血淋巴細胞分離液）醫(yī)用級
LTS10770125		樣本密度分離液（人外周血淋巴細胞分離液）醫(yī)用
LTS1083	TBD	大鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1083P	TBD	大鼠臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1083Z	TBD	大鼠腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1083PK		大鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1092	TBD	小鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1092P	TBD	小鼠臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1092Z	TBD	小鼠腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1092PK		小鼠脾臟淋巴細胞分離液試劑盒
HCLTS1092		小鼠淋巴細胞*培養(yǎng)基
CLTS1092		小鼠淋巴細胞無血清培養(yǎng)基
TBD10965MAC		兔腫瘤組織巨噬細胞分離液KIT
LTS10965	TBD	兔外周血淋巴細胞分離液試劑盒
LTS10965P	TBD	兔臟器組織淋巴細胞分離液
LTS10965Z	TBD	兔腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1079	TBD	狗外周血淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1079P	TBD	狗臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1079Z	TBD	狗腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1086	TBD	牛外周血淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1086P	TBD	牛臟器組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1086Z	TBD	牛腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1085	TBD	豚鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒
LTS1085P	TBD	豚鼠臟器組織淋巴細胞分離液
LTS1085Z	TBD	豚鼠腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液
LTS1090C	TBD	雞外周血淋巴細胞分離液
LTS1090CP	TBD	雞臟器組織淋巴細胞分離液
LTS1078H	TBD	猴外周血淋巴細胞分離液
LTS1078HP	TBD	猴臟器組織淋巴細胞分離液
LTS1078HZ	TBD	猴腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液
LTS1110	TBD	豬外周血淋巴細胞分離液
LTS1110P	TBD	豬臟器組織淋巴細胞分離液
LTS1110C	TBD	豬腸黏膜組織淋巴細胞分離液
LTS1110Z	TBD	豬腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液
LTS1094	TBD	馬外周血淋巴細胞分離液
LTS1094P	TBD	馬臟器組織淋巴細胞分離液
LTS1094Z	TBD	馬腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液
LTS1087	TBD	羊外周血淋巴細胞分離液
LTS1087P	TBD	羊臟器組織淋巴細胞分離液
LTS1087Z	TBD	羊腫瘤浸潤組織淋巴細胞分離液
LTS1080F	TBD	魚全血淋巴細胞分離液
LTS1080FZ	TBD	魚組織淋巴細胞分離液

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